Hogyan készítsünk ilyen immunhisztokémiai festőpuffereket
A foszfáttal pufferolt sóoldat (PBS) egy pufferoldat, amelyet gyakran használnak immunhisztokémiai (IHC) festéshez és gyakran használják biológiai kutatások során. A PBS vízbázisú sóoldat, amely nátrium-hidrogén-foszfátot, nátrium-kloridot és egyes esetekben kálium-kloridot és kálium-dihidrogén-foszfátot tartalmaz.
Immunhisztokémiai festés
Az immunhisztokémia arra utal, hogy az antigéneket, például a fehérjéket detektálják a szövetrészek sejtjeiben, az antitestek elvének alkalmazásával, amelyek specifikusan kötődnek a biológiai szövetekben lévő antigénekhez.
Immunfluoreszcens festés volt az első immunhisztokémiai festési módszer.
Az antigének akkor válnak láthatóvá, ha az antigén-ellenanyag-kötési reakció következtében fluoreszcens festékeket használó antitestekkel konjugálódnak. Ez a folyamat akkor következik be, amikor egy fluoreszcens mikroszkóp alatt egy adott hullámhosszú fény izgalmas fényével aktiválódik.
Az oldatok ozmolaritása és ionkoncentrációja megegyezik az emberi szervezet testtömegével - izotóniásak.
A PBS receptje
PBS-t többféle módon is előállíthat. Többféle képlet létezik. Némelyikük nem tartalmaz káliumot, míg mások kalciumot vagy magnéziumot tartalmaznak.
Ez a recept viszonylag egyszerű. 10 x PBS törzsoldat (0,1 M). Azonban elkészíthet egy 1X készletoldatot is, vagy kezdheti el ezt a 10X receptet, és hígítsa 1-re.
Az egész folyamat körülbelül 10 percet vesz igénybe.
A Tween hozzáadásának lehetősége is biztosított.
Mi kell ahhoz, hogy PBS puffert hozzunk létre
- Nátrium-foszfát monobázisos (vízmentes)
- Nátrium-foszfát kétbázisú (vízmentes)
- Nátrium-klorid
- Mérjük meg és mérjük a csónakokat
- Mágneses keverő és keverőpálca
- A kalibrált pH-szondát és a pH beállításához megfelelő megoldásokat
- 1 literes mérőlombikban
- Tween 20 (opcionális)
Hogyan készítsünk foszfátpufferelt sóoldatot (PBS)
Mérjünk be 10,9 g vízmentes nátrium-foszfát kétbázisú (Na2HP04), 3,2 g vízmentes nátrium-foszfát monobázisos (NaH2P04) és 90 g nátrium-klorid (NaCl) oldatot.
Oldjunk fel 1 literes desztillált vízben.
Állítsuk be a pH-t 7,4-re, és végezzük az oldatot 1 liter végtérfogatra.
Használat előtt hígítson 10x-ot, és szükség esetén módosítsa a pH-t.
PBS oldatot készíthet 0,5% Tween 20-ból, 5 ml Tween 20 hozzáadásával az 1L oldathoz.
Tippek a PBS puffer készítéséhez
Tárolja a puffert szobahőmérsékleten a PBS oldat elkészítése után.
A nem vízmentes reagensek helyettesíthetők, de újra meg kell számolnunk a megfelelő masszát a hozzáadott vízmolekulák befogadására.
Foszfáttal pufferolt sóoldat (PBS) felhasználása
A foszfáttal pufferolt sóoldat sokféleképpen használható, mert izotóniás és nem toxikus a legtöbb sejt számára. Alkalmasak az anyagok hígítására, és gyakran használják a cellák tárolására. A PBS hígítóanyagként különféle módszerekkel használható száraz biomolekulákra, mert a benne lévő vízmolekulák például az anyag-fehérje köré szerveződnek. Ezt "szárítják" és szilárd felületre rögzítik.
A pH állandó és állandó marad, hogy megakadályozza a sejtek elpusztítását.
Az anyaghoz kötődő vékonyréteg megakadályozza a denaturálódást vagy más konformációs változásokat. A karbonát pufferek ugyanarra a célra használhatók, de kevésbé hatékonyak.
PBS alkalmazható referenciaspektrum felvételére ellipszometriai fehérjeadszorpció mérésekor is.