Ezek a pufferek alkalmazhatók biológiai alkalmazásokhoz közel semleges pH-nál
A foszforsav három pKa értéke (CRC Handbook of Chemistry és Physics) 2,16, 7,21 és 12,32. A mononátrium-foszfátot és konjugált bázisát, dinátrium-foszfátot általában pH 7 értékű pufferek előállítására alkalmazzuk a biológiai alkalmazásokhoz, amint azt itt mutatjuk.
A puffer kicsit nehezebb, mint TAE és TBE puffer készítése. Nem nehéz azonban. Egyszerűen átlag. Kb. 10 percet kell tartania ahhoz, hogy felcsapja ezt a puffert. Itt van, hogyan.
1. Döntsék el a puffertulajdonságokat
Mielőtt elkészítené a puffert, először tudnia kell, hogy milyen molaritást kíván, mennyi térfogat és milyen a kívánt pH. A legtöbb puffer a leginkább 0,1 és 10 M közötti koncentrációban működik. A pH-nak a pKa sav / konjugált bázis 1 pH-egységen belül kell lennie. Az egyszerűség kedvéért a minta számítása 1 liter pufferre lesz.
2. Határozza meg a sav arányát bázisra
Használja a Henderson-Hasselbalch-egyenletet (alább) annak meghatározására, hogy a sav-bázis milyen arányban van ahhoz, hogy pufferoldatot készítsen a kívánt pH-értékről. Használja a kívánt pH-értékhez legközelebb eső pKa értéket, és az arány a pKa-nak megfelelő savas-bázis konjugált párra vonatkozik.
HH egyenlet: pH = pKa + log ([alap] / [sav])
6,9 pH-értékű pufferhez [Base] / [Acid] = 0,4898
Helyettesítő [Acid] és Solve for [Base]
A puffer kívánt molaritása a [Acid] + [Base] összege.
Egy 1 M-os puffer esetén [Base] + [Acid] = 1 és [Base] = 1 - [Acid]
Ha ezt a 2. egyenlet egyenlettel helyettesítjük, a következőket kapjuk:
[Sav] = 0,6712 mol / L
Oldja fel a [Sav]
Az egyenlet segítségével: [Base] = 1 - [Acid], kiszámíthatja, hogy:
[Base] = 0,3288 mol / L
3. Keverje össze a savas és konjugátum alapot
Miután felhasználta a Henderson-Hasselbalch-egyenletet, hogy kiszámítsa, milyen arányban van a sav és a bázis a pufferhez, készítsen alig 1 liter oldatot a megfelelő mennyiségű mononátrium-foszfát és dinátrium-foszfát felhasználásával.
4. Ellenőrizze a pH-t
Használjon pH-próbát annak megerősítésére, hogy elérte a puffer megfelelő pH-ját. A foszforsav vagy nátrium-hidroxid (NaOH) segítségével szükség esetén enyhén állítsuk be.
5. Javítsa ki a hangerőt
Miután elérte a kívánt pH-t, a puffer térfogatát 1 literre tolja. Ezután hígítsuk fel a puffert. Ugyanez a puffer hígítható 0,5 M, 0,1 M, 0,05 M vagy bármi közti puffer előállítására.
6. Tippek a pufferhez
Ne feledje, hogy a pKa-t nem lehet pontosan mérni. A szakirodalomban különböző forrásokból kicsit más értékek állhatnak rendelkezésre.
7. Amire szüksége van
A puffer elkészítéséhez három anyagra van szükséged, míg a többi anyag felszerelés. Az anyagok a pH beállításához mononátrium-foszfát, dinátrium-foszfát és foszforsav vagy nátrium-hidroxid.
Szükséged lesz egy pH-mérőre és szondára és megfelelő laboratóriumi eszközökre is. Ez magában foglal egy mérőlombikot, mérőhengereket, főzőpoharakat és rudakat.
Végül szükséged lesz egy keverő főzőlapra.