Ezt a puffert a DNS elektroforézis szétválasztására használják
A TBE puffer különösen alkalmas kisebb DNS-fragmensek (MW <1000) szétválasztására, mint például a restrikciós enzimes emésztés kis termékei.
A TBE nagyobb puffer kapacitással rendelkezik, és élesebb felbontást biztosít, mint a TAE puffer . A TAE puffer Tris-bázis, ecetsav és EDTA (trisz-acetát-EDTA) összetételű oldat.
A TBE általában drágább, mint a TAE, és gátolja a DNS-ligázt, ami problémákat okozhat, ha a későbbi DNS-tisztítási és ligálási lépéseket célozzák. A következő három egyszerű lépéssel megtudhatja, hogyan készíthet TBE puffert. A puffer létrehozásához nem szabad több mint 30 percig tartani. Itt van, hogyan:
Készítsünk egy EDTA készletoldatot
EDTA (etilén-diamin-tetraecetsav) oldatot kell előkészíteni az idő előtt. Az EDTA nem fog teljes mértékben oldódni, amíg a pH-t 8,0-re nem állítjuk be. 0,5 M EDTA 500 milliliter törzsoldatához mérjük meg 93,05 g EDTA dinátrium-sót (FW = 372,2). Ezután oldjuk fel 400 ml ionmentesített vízzel, és állítsuk be a pH-t NaOH-dal. Ezután töltsük fel az oldatot 500 ml végtérfogatra.
Készítsünk egy TBE készletoldatot
A TBE koncentrált (5x) törzsoldatát 54 g Tris bázist (FW = 121,14) és 27,5 g bórsavat (FW = 61,83) mérjük, és mindegyik körülbelül 900 ml ionmentesített vízben feloldjuk. Ezután adjunk hozzá 20 ml 0,5 M EDTA-t (pH = 8,0), és állítsuk az oldatot 1 liter végtérfogatra.
Ez az oldat szobahőmérsékleten tárolható, de régebbi oldatokban csapadék keletkezik. Tárolja a puffert üvegpalackokban és dobja ki, ha csapadék képződött.
Készüljön fel a TBE munkamegoldására
Agaróz gélelektroforézissel TBE puffert alkalmazhatunk 0,5x koncentrációban (a koncentrált törzs 1:10 arányú hígítása). Hígítsuk fel a törzsoldatot 10x-re ionmentes vízben. A végső oldható koncentrációk 45 mM Tris-borát és 1 mM EDTA. A puffer már használatra kész agaróz gél futtatására .
Amire szükséged van
A TBE puffer készítéséhez csak négy anyag szükséges. A lista többi eleme a berendezés. A négy szükséges anyag az EDTA dinátrium só, Tris bázis, bórsav és ionmentesített víz.
Ami a berendezéseket illeti, megfelelő pH-mérő és kalibrációs szabványok szükségesek. Ezenkívül 600 milliliter és 1500 milliliteres főzőpoharak vagy lombikok szükségesek. A berendezés igényeinek lekerekítése mérőhengerekből áll, rudakat kevernek és keverik a lemezeket.
Ellenőrizze a készletet a laborban, amelyet használni fog, hogy minden elképzelhető legyen, mielőtt elkezdené. Semmi sem rosszabb, mint a megoldás készítésének közepén, mert a megfelelő anyagokból kifogyott.
Ha a laborod az iskolában vagy a munkahelyén tartózkodik, ellenőrizze a megfelelő személyzettel, hogy meggyőződhet róla, hogy a raktár összes eleme megtalálható. Így időt és energiát takaríthat meg a végén.