Ezt a puffert a DNS mozgásának tanulmányozására használják
Ez a puffer alacsony ionerősséggel és alacsony pufferképességgel rendelkezik. Leginkább a nagy (> 20 kb) DNS-elemek elektroforézisére alkalmas, és gyakran, vagy hosszabb (> 4 h) gélfolyási időkig kell cserélni vagy újra kell keringetni.
Ezt szem előtt tartva érdemes megfontolni a puffer több tételét.
Mivel a puffer könnyen elkészíthető, és a lépések gyorsan elvégezhetők, egynél több adag egy időben történő előállítása nem lehet különösen időigényes vagy nehezen lehúzható. Az alábbi utasítások használatával csak 30 percet vesz igénybe a TAE puffer készítése. Itt van, hogyan:
Készítsünk egy EDTA készletoldatot
EDTA (etilén-diamin-tetraecetsav) oldatot készítenek az idő előtt. Az EDTA nem fog teljes mértékben oldódni, amíg a pH-értéket 8,0-re nem állítjuk be. 0,5 M EDTA 500 milliliter törzsoldatához mérjük meg 93,05 g EDTA dinátrium-sót (FW = 372,2). 400 ml-es ionmentesített vízben oldjuk, és a pH-t nátrium-hidroxiddal (NaOH) állítjuk be. Töltsük fel az oldatot 500 ml végtérfogatra.
A TAE készletezési megoldása
A TAE koncentrált (50x) törzsoldatát 242 g Tris bázist (FW = 121,14) mérjük, és körülbelül 750 ml ionmentesített vízben feloldjuk.
Óvatosan adjunk hozzá 57,1 ml jégecetet és 100 ml 0,5 M EDTA-t (pH = 8,0). Ezután állítsuk be az oldatot 1 liter végső térfogatra. Ez a törzsoldat szobahőmérsékleten tárolható. Ennek a puffernek a pH-ját nem állítjuk be, és körülbelül 8,5-nek kell lennie.
Készítsen egy TAE működési megoldását
Az 1x TAE puffer munkaoldatát úgy állítjuk elő, hogy a törzsoldatot egyszerűen hígítjuk ionmentes vízben 50x-re.
A végkoncentráció 40 mmol / l. Tris-acetát és 1 mM EDTA. A puffer már használatra kész agaróz gél futtatására.
Amire szükséged van a pufferhez
Mivel a TAE-puffer csak gyors és egyszerű utasításokat igényel, az ehhez szükséges anyagok száma nem túlzott. Csak EDTA dinátrium sót, Tris bázist és jégecetet kell használni.
A puffer elkészítéséhez szükség szerint pH-mérő és kalibrációs szabványok is szükségesek. Szüksége lesz 600 milliliter és 1500 milliliteres főzőpoharakra vagy lombikokra, valamint mérőhengerekre. Végül szükséged lesz ionmentesített vízre, kevergetni a rudakat, és keverni a lemezeket.
Csomagolás
Hol tervezi a puffert - egy iskolai oldalon, egy munkahelyen vagy egy másik helyen, például otthonában? Ellenőrizze a készletet, mielőtt megkezdené, hogy megbizonyosodjon róla, hogy a TAE pufferhez mindegyik fenti anyag van.
Ha inkább nem kell fizetnie az anyagokat, javasoljuk, hogy a puffert az otthonán kívül ajánljuk. Könnyen megrendelheti az online anyagokat, vagy látogasson el nekik egy speciális boltba.