A bakteriális kultúra fagyasztása (liofilizálás)

A liofilizálás vagy a fagyasztva szárítás rövid laboratóriumi eljárás

A fagyasztva szárítás, amelyet liofilizálásnak vagy kriódserkálásnak is neveznek, az a folyamat, amikor a terméket fagyasztva (majd vákuum alá helyezzük) eltávolítjuk a termékből, így a jég szilárd anyagról gőzre változik, folyadékfázis nélkül. A jégeket (vagy más fagyasztott oldószereket) a szublimáció útján távolítják el a termékből, és a kötött vízmolekulákat eltávolítják a deszorpciós folyamaton.

A liofilizálás alapjai

A bakteriális, gomba, élesztő vagy más mikroorganizmus kultúra hosszú távú tárolásának egyik legjobb módja a fagyasztva szárítás folyamata. Ez a rövid laboratóriumi eljárás bármely kereskedelemben kapható, fagyasztva szárítóval végezhető el, amely megóvja a kultúra gyűjteményét. Mivel a liofilizálás a legösszetettebb és legkedveltebb szárítási forma, az eljárás általában a nagy értékű érzékeny, hőérzékeny anyagokra korlátozódik. A fagyasztás által nem károsított anyagokat általában liofilizálják, így a hűtőtárolás felesleges.

Ez a folyamat akár 3 órát, akár 24 órát is igénybe vehet, a kultúra növekedési idejét nem beleértve.

A liofilizálás lépésről-lépésre

1. Először a mikroorganizmus egynapos kultúráját vagy gyepét az LB-ben vagy más megfelelő tápanyag-agar lemezen tenyésztjük.

2. Ezután előkészítse a steril krimpelős kupakot az autoklávozással idő előtt, a sapkák (gumi dugók) lazán a tetejére helyezve. Helyezzen papírcímkéket, amelyeket a csöveken belüli tenyészet azonosításával kinyomtattak az autoklávozás előtt. Alternatív megoldásként a sterilitásra tervezett kupakokat használjon.

1. Adjunk hozzá 4 ml liofilizáló puffert a lemezhez. Szükség esetén a sejteket steril üvegrúd segítségével le lehet szuszpendálni.

2. Gyorsan vigye át a tenyésztő szuszpenziót a sterilizált fiolákba. Adjon hozzá kb. 1,5 ml injekciós üvegenként. Tömítse a gumidugóval.

3. Fagyassza le a tenyésztő szuszpenziót az injekciós üvegek belsejében úgy, hogy az injekciós üvegeket -20 ° C-os fagyasztóba helyezi.

1. Miután a tenyészeteket megfagyasztották, előkészítsük a fagyasztva szárítót úgy, hogy bekapcsoljuk, és lehetővé tesszük a megfelelő hőmérséklet és vákuumos körülmények stabilizálódását. Tegye ezt a gyártó utasításai szerint a használt fagyasztva szárító adott márkájához.

2. Óvatosan és aszeptikusan helyezze az injekciós üveget lazán az injekciós üvegek tetejére úgy, hogy a fagyasztva szárítás során a nedvesség el tud menekülni, és helyezze az ampullákat egy fagyasztva szárító kamrába. A vákuumot a gyártó utasításainak megfelelően vigye a kamrába.

3. Hagyjuk a tenyésztési időt teljesen liofilizálni (kiszáradni). Ez néhány órától egészen az éjszakáig terjedhet, függően az egyes minták mennyiségétől és hány mintáitól.

4. Távolítsa el a mintákat a fagyasztva szárító kamrából a gyártó utasításai szerint, és azonnal zárja le az injekciós üvegeket a gumi sapkákkal, majd a préselő tetejét.

5. A liofilizált tenyészetgyűjteményt szobahőmérsékleten tároljuk.

Termékek lesz szüksége

• Fagyasztva szárító
• Tápanyag vagy más megfelelő agarlemez (és inkubátor a kultúra tenyésztéséhez)
• Üveg rúd
• Liofilizációs puffer
• Crimp-tetejű injekciós üveg gumitömlõkkel (és a kapszulák felhúzására)
• Mélyhűtő

<sub>Referencia:

SP Scientific. A fagyasztva szárítás alapelvei. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>