Az enzim kinetikájának mérése
Mint egy kis háttér, az enzimek olyan fehérjék, amelyek katalizátorként hatnak az aktiválási energia mennyiségének csökkentésére a reakció előfordulásához. Az aktiválási energia az az energia, amire a reakciók "elindulására" van szükség, mivel számos reakció nem fordul elő nagyon gyorsan (vagy egyáltalán előfordul) ha termodinamikailag lehetséges.
Az enzimek specifikus reakciókat katalizálnak egy adott helyen (aktív helyként ismert), ahol a reagensek kötődnek és reagálnak a termékek előállítására. Az aljzatok olyan aktív helyszíneket tartalmaznak, amelyek csak ezekre jellemzőek, így egyetlen más anyag sem kötődik vagy reagálhat ugyanazon a helyen. Mint egy zár és kulcs, mindegyik enzim csak egy specifikus reakciót katalizál (néhány kivételtől eltekintve).
A fajlagos aktivitást fehérje-izolálási módszerekben alkalmazzuk a tisztítás százalékos arányára. Fontos, hogy ismerje meg ezt az egységet az enzimek vásárlásakor, hogy pontosan megmutassa, mekkora tiszta enzimet kapsz.
Az enzim kinetikájának mérésekor (az enzim szubsztráttal vagy felülettel való reakciójának sebessége) a specifikus aktivitást a szubsztrát mennyisége határozza meg, amelyet az enzim az enzimkészítmény mg / proteintartalmú enzimkészítménnyel (reakciók katalizátora), egységnyi időre konvertál.
Egy példa a konkrét tevékenységre:
- Az izolált enzim specifikus aktivitását tisztítás előtt 150 umol / perc / mg fehérjékben tisztítottuk, és 800 umol / perc / mg tisztítás után.
A specifikus aktivitás az enzim tisztaságának fontos mércéje. A tiszta enzim különböző tételeinek azonos értékekkel kell rendelkezniük, és még egy enzimoldat hígításával is sokszor azonos specifikus aktivitási értékekkel kell rendelkezniük, bár különböző enzimaktivitási értékek lesznek. Ez azért van így, mert a specifikus aktivitás kiszámításakor a számláló (egységek / ml) és a nevező (mg / ml) egyaránt érintett.
A specifikus aktivitás nagyon eltér az aktivitástól, de a specifikus aktivitás kiszámítása még mindig a tevékenység értékétől függ. Ez azt jelenti, hogy a megadott specifikus aktivitásérték az enzimegység meghatározásától is függ.
Azok az enzimek tételei, amelyek a vártnál alacsonyabb specifikus aktivitási értéket tartalmaznak, tartalmazhatnak olyan enzimmolekulákat, amelyek megváltoztak vagy szennyeződtek.
Az enzimaktivitást befolyásoló tényezők
Lehetséges, hogy az egyik enzimnek eltérő mért aktivitási értékei lehetnek különböző laboratóriumokban mérve (azaz a mért aktivitás valós különbségei, a különböző egységdefiníciók által okozott látszólagos különbségek).
A vizsgálat módja (az enzimek tisztaságának meghatározására szolgáló módszer) befolyásolja a bejelentett aktivitási értékeket. Például az enzimek általában aktívabbak a 37 ° C hőmérséklet között a 20 ° C-os hőmérséklethez képest, így ha egy vizsgálatot 21 ° C-on végzünk, akkor az értékek eltérnek a 32 Celsius-fokos , a vizsgálatokat 20-37 ° C közötti hőmérsékleten végezzük).
Így az enzimegység meghatározása jobb lenne, ha 1 egység (U) az enzim mennyisége, amely normál körülmények között 1 nmol szubsztrát / perc reakciót katalizál.